人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷 NK-92

形態特性聚團生長特性懸浮特征特性NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92MI細胞是轉染得到的源自NK-92細胞的IL-2非依賴的NK細胞株。親本細胞NK-92通過微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標記陰性。其親本IL-2依賴的細胞株NK-92細胞及另一株同樣來源于NK-92細胞株的IL-2非依賴的細胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細胞和NK-92CI細胞這兩個變種都包含、表達并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細胞不合成表達。1998年9月提交到ATCC的培養物污染了支原體，其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測，結果都呈陰性。培養條件MEMα＋0.2mM Inositol＋0.1mM β-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋12.5% HS＋12.5% FBS傳代方法1:2凍存條件無血清凍存液

常溫細胞收貨后處理方法

1. 收到細胞后，首先觀察培養瓶是否完好，若發現培養瓶有破裂，培養基外溢、渾濁等現象，請及時拍照并與我們聯系。

2. 用75%酒精對培養瓶表面進行消毒處理，將培養瓶置于細胞培養箱中靜置培養2~4 h，以恢復細胞狀態。

3. 靜置完成后，取出培養瓶，顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）前三天照片為重要售后依據。如發現細胞異常請及時與我們聯系，如果細胞簽收三天內未與我們聯系，則默認為收貨良好。

4. 若細胞密度超過80%，則可以根據提供的細胞培養步驟進行傳代或凍存；若細胞密度未達到80%，收集瓶中完quan培養基，留6mL培養基，放入細胞培養箱中繼續培養。

凍存細胞收貨后處理方法

1. 收到細胞后，首先觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好，是否有解凍情況，若發現干冰完quan汽化或凍存管有解凍現象，請及時拍照并與我們聯系。如果細胞簽收三天內未與我們聯系，則默認為收貨良好。

2. 復蘇第一管如有活性、狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第 二管。

特別說明：未與我方聯系，擅自復蘇第二管出現問題不予售后。

細胞培養步驟

1. 復蘇細胞：從液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞，水浴鍋提前打開預熱37℃。

1) 將查找到的凍存細胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍；

2) 將凍存管中的細胞移至含 5ml 完quan培養基的離心管中，1000rpm 離心 5min；

3) 棄去上清液，補加4-6mL完quan培養基后吹勻，接種于T25培養瓶中（或6cm皿中），培養過夜，第二天換液并檢查細胞密度。

2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1) 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化3-5min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后，加5ml以上含10%血清的完quan培養基終止消化；

3) 輕輕吹打細胞，完quan脫落后吸出至離心管中，1000rpm離心5-8min，棄去上清液，補加1-2mL完quan培養基后吹勻；

4) 按5-6mL/瓶補加完quan培養基，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含5-6 mL完quan培養基的培養皿中或者培養瓶中。

（即1個T25傳代接種至2~3個T25或者2~3個直徑為6cm的培養皿）

3. 細胞凍存：細胞收集參照傳代步驟1~2，按凍存數量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜，后續可轉入液氮罐中長期保存。

關于細胞株售后服務

一、細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2、3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

二、細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定。