為保證實驗的準(zhǔn)確性和安全性必須做質(zhì)控菌種管理規(guī)定

　　為保證實驗的準(zhǔn)確性和安全性必須做質(zhì)控菌種管理規(guī)定
　　微生物實驗用菌種是進(jìn)行新產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。為了保證微生物實驗的準(zhǔn)確靈敏和人員及環(huán)境的衛(wèi)生安全,特制定以下規(guī)定:
　　1. 菌種采集。實驗室用菌種一是到國家法定機構(gòu)采購,二是購買ATCC菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種來源,均由公司統(tǒng)一采集。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標(biāo)識。
　　2.菌種的活化:購買的標(biāo)準(zhǔn)菌種必須要求是凍干粉,科研中菌種交流可以為斜面或液體。
　　菌種的活化好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養(yǎng)基。具體使用培養(yǎng)基的情況如下表,詳細(xì)菌種使用方法見附表:
　　方法培養(yǎng)基
　　方法1 胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA),非選擇性羊血瓊脂,PCA或營養(yǎng)瓊脂,35℃正常環(huán)境培養(yǎng)24-48小時。
　　方法2 非選擇性羊血瓊脂,35℃正常環(huán)境培養(yǎng)24-48小時。
　　方法3 巧克力瓊脂平板,35℃5-10%CO2環(huán)境培養(yǎng)24-48小時。
　　方法4 CDC厭氧血瓊脂35℃厭氧培養(yǎng)48-72小時;部分專性厭氧菌能需要5-7天,才能充分生長;對于梭菌,以下新鮮培養(yǎng)基也可選用:營養(yǎng)瓊脂,TSA瓊脂,PCA瓊脂,需培養(yǎng)48-96小時。
　　方法5 沙堡氏葡萄糖Emmons瓊脂25-28℃培養(yǎng)3-7天;也可用PDA瓊脂。
　　方法6 巧克力瓊脂平板,35℃微需氧環(huán)境培養(yǎng)48-72小時。
　　方法7 改良羅氏瓊脂或Middlebrook瓊脂,35℃5-10%CO2或正常環(huán)境培養(yǎng)7天。
　　方法8 緩沖活性碳酵母提取物瓊脂,35℃正常環(huán)境培養(yǎng)3-5天。
　　方法9 巧克力瓊脂平板,35℃5-10%CO2環(huán)境培養(yǎng)48小時。
　　方法10 先用腦心浸出液肉湯或TSB培養(yǎng)基35℃增菌培養(yǎng)18-24小時,再劃線至TS A瓊脂35℃正常環(huán)境培養(yǎng)24-48小時。
　　方法11 先接種于MRS肉湯35℃增菌培養(yǎng)24-48小時,再劃線接種至含羊血的哥倫比亞CNA培養(yǎng)基35℃5%CO2環(huán)境培養(yǎng)24-48小時。
　　方法12 PDA瓊脂45℃正常環(huán)境培養(yǎng)48-72小時。
　　方法13 先接種于10B精氨酸肉湯,作系列梯度稀釋35℃正常培養(yǎng)至培養(yǎng)基變成粉紅色,接入A-8瓊脂。3.菌種保存。所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺帳,詳細(xì)記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種菌種一定要有本公司的檢測鑒定報告(具體的的鑒定方法見ATCC提供的菌種證書方法);具體菌種保存方法如下:
　　3.1 干粉菌種:購買的干粉菌種保存于2-8℃冰箱中,可保存3-5年。
　　3.2 斜面菌種或液體菌種:
　　3.2.1 液氮罐保存方法:用于代菌種的長期保存,每種菌種保存5管。
　　(1)準(zhǔn)備用于液氮保藏的安瓿管或菌種保存管(塑料),要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容1.2mm液體的。
　　(2)加保護(hù)劑與滅菌保存細(xì)菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細(xì)胞時,則將空安瓿管塞上棉塞,121℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內(nèi)預(yù)先加入保護(hù)劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限,而后再用121℃滅菌15分鐘。