養(yǎng)好細(xì)胞注意點(diǎn)（三）

 （一）如何避免細(xì)胞污染

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染的血清和污染的細(xì)胞等。嚴(yán)格無(wú)菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好的細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配制是減低污染的方法。

（二）支原體 （mycoplasma）污染的細(xì)胞， 對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響

不能以肉眼觀察出支原體污染異狀。除極有經(jīng)驗(yàn)的專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀分辨。

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞的生長(zhǎng)參數(shù)，代謝及研究任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為 mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)方有意義。

（三）培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且 pH 值會(huì)越來(lái)越偏堿性

培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的 CO₂ 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑 （通常為 phenol red）的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿的結(jié)果，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾 CO_{2 ，}以調(diào)整 pH 值。或酸堿調(diào)PH。

（四）L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。

（五）什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為 PH 值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。